Pullulanase

Pullulanase is een maltose-induceerbaar zetmeel--enzym dat de vertakkingen verwijdert van Klebsiella pneumoniae. De uitscheiding is afhankelijk van producten van ten minste acht uitscheidingsgenen die zich aan beide zijden van het pullulanase-gen (pulA) in het chromosoom van Klebsiella bevinden (Kornacker en Pugsley, 1990b). Pullulanase kan tot expressie worden gebracht en uitgescheiden in E. coli, op voorwaarde dat gelijktijdige expressie van de pullulanase-uitscheidingsgenen plaatsvindt (d'Enfert et al., 1987). Het eiwit bestaat als een blootgesteld, aan het celoppervlak gebonden tussenproduct voordat het aan het medium wordt afgegeven aan het begin van de stationaire groeifase (Michaelis et al., 1985). De export- en secretie-informatie lijkt zich in de N-terminale helft van pullulanase te bevinden (Kornacker en Pugsley, 1990a). Hybride eiwitten waarin het C-terminale gebied van pullulanase was vervangen door respectievelijk het rijpe -lactamase en alkalische fosfatase (PhoA), en dus gefuseerd met de eerste 832 N-terminale aa van pullulanase, bleken tijdelijk aan het oppervlak te zijn verankerd-wanneer ze samen tot expressie werden gebracht met de pullulanase-uitscheidingsgenen in E. coli (Kornacker en Pugsley, 1990b). Hoewel beide enzymen aan het oppervlak aanwezig waren, werd PhoA minder efficiënt blootgesteld, wat te wijten zou kunnen zijn aan incompatibele secundaire en tertiaire structuren van het heterologe passagierseiwit.